卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶(LCAT)ELISA試劑盒基本信息
LCAT由肝臟合成，在血漿發(fā)揮酶作用。它催化HDL中的卵磷脂-2-脂肪酸轉(zhuǎn)移到FC，生成CE和溶血磷脂。血在以上Apo的作用下，LCAT可對(duì)FC和CE作雙向調(diào)節(jié)。LCAT選擇性底物為HDL，對(duì)VLDL和LDL幾乎不起作用。遺傳性和繼發(fā)性LCAT缺陷、酒精中毒性肝炎時(shí)，出現(xiàn)HDL代謝異常。
卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶(LCAT)ELISA試劑盒檢測(cè)技術(shù)簡(jiǎn)介
雙抗體夾心法
1. 包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱洗滌，下同）。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔）。
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。
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