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丙酮酸激酶(PK)elisa試劑盒太好用啦!
更新時間:2017-10-04   點擊次數:990次

丙酮酸激酶(PK)elisa試劑盒簡介

丙酮酸激酶,別名丙酮酸磷轉稱酶、丙酮酸激酶,其分子式wieC9H9N,縮寫式為ATP:丙酮酸-2-O-轉移酶。在糖酵解系統里,它是催化形成第二個ATP反應的酶。EC2.7.1.40。能以烯醇(phosphoenolpyruv- ate)丙酮酸和ADP生成丙酮酸和ATP·ΔGo1=-7.5kcal。除需要二價金屬離子外(Mg2+和Mn2+)外,還需要一價金屬離子(K+.Rb+,Cs+),在生理上起作用的大概是K+。分子量約25萬。是催化ADP為ATP的形成,結果是形成丙酮酸的終產物。

中文名稱

丙酮酸激酶

別稱

丙酮酸磷轉稱酶;丙酮酸激酶

EINECS登錄號

232-616-2

CAS登錄號

9001-59-6

化學式

wieC9H9N

英文名

Kinase(phosphorylating), pyruvate

丙酮酸激酶(PK)elisa試劑盒實驗條件選擇給您  

在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:

  (1) 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。

  (2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。

  (3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。

(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。

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